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DuraScribe® T7 Transcription

　更新時間：2015-03-03　點擊量：1360

名稱： DuraScribe? T7 Transcription Kit

貨號： DS010910

單位： 10 Rxns

DuraScribe? T7 Transcription Kit
The DuraScribe? T7 Transcription Kit試劑盒是一個體外轉錄試劑盒產生稱為DuraScript? RNA的RNA，能夠*抵抗RNase A的降解.
The DuraScribe T7 Transcription Kit試劑盒含有DuraScribe T7 RNA聚合酶,該聚合酶是T7RNA聚合酶的Y639F突變體，能夠有效將2′-Fluorine-CTP (2′-F-dCTP), 2′-Fluorine-UTP (2′-F-dUTP), ATP 和GTP合成到RNA酶抗性的稱為DuraScript RNA的轉錄本中 (Figure 1). DuraScribe T7 RNA 聚合酶與野生型的T7 RNA聚合酶使用相同的T7啟動子。
應用
DuraScript RNA 被證實適用于RNA配體合成，核酶，RNA干擾(RNAi)和反義RNA等研究。
好處

  • DuraScript RNA能夠抵抗RNase A和DNase
  • 高產DuraScript RNA
  • T7 體外轉錄反應. DuraScribe DuraScribe T7 RNA 聚合酶與野生型的T7 RNA聚合酶使用相同的T7啟動子.
  • 是RNA配體研究的理想選擇. 有大量的RNA適配體研究引用DuraScribe Kit試劑盒
  • SELEX-兼容. DuraScript RNA 可用于SELEX選擇過程。
  • 制備長的或短的DuraScript RNA. 帶有T7聚合酶啟動子的雙鏈寡核苷酸，線性質粒，PCR產物均可被轉錄.

Table 1.一個DuraScribe? Kit試劑盒反應產生的DuraScript? RNA量。3-Kb 長度的DNA模板被在不同位置打斷形成線性化，然后通過DuraScribe T7 Transcription Kit 反應4小時。DuraScript RNA產物量以微克 (μg)和皮摩爾(pmol)顯示。


產生的DuraScript RNA的大小

DuraScript RNA的產量 (μg)

DuraScript RNA的產量(pmol)

2600 nts

100 ug

116 pmol

1400 nts

58ug

124 pmol

330 nts

18ug

164 pmol

88 nts

9ug

307 pmol

Figure 1
Figure 1
Figure 1. DuraScribe? T7 RNA聚合酶有效將2′-F-dCTP和2′-F-dUTP嵌入到全長DuraScript? RNA。 2′-F-dC和2′-F-dU核苷2′-位置的氟能夠阻止RNase A的降解。

 

 

Figure 2Figure 2. DuraScribe? T7 轉錄反應的RNA產量. 標準反應(4-6小時)產生40-60 μg的1.4-kb長度的DuraScript? RNA。

Figure 3
Figure 3. DuraScript? RNA抵抗RNase A的降解. 1.4- kb長度的標準RNA轉錄本和1.4-kb長度的 DuraScript RNA轉錄本加入1 U的高純度RNA酶A孵育30分鐘。標準的RNA轉錄本被*降解，而DuraScript RNA轉錄本仍然完整。Lane M, 分子標記; lane 1, 1.4-kb 標準RNA轉錄本; lane 2,標準RNA被RNA酶處理后; lane 3, 1.4-kb DuraScript RNA; lane 4, DuraScript RNA 被RNase A處理后。

Figure 4
Figure 4. DuraScript? RNA*抵抗 "手指"核酸酶。使用無菌水和被受試者手指污染的水制備的1.4-kb的標準RNA轉錄本和1.4-kb的 DuraScript RNA 轉錄本。標準RNA被手指核酸酶廣泛降解，而DuraScript RNA保持完好。M, 分子標尺; Lane 1, 標準RNA 轉錄本; Lane 2, 手指核酸酶污染后的標準RNA; Lane 3, DuraScript RNA; Lane 4, 手指核酸酶污染后的DuraScript RNA.

  Catalog No.Size
DuraScribe? T7 Transcription Kit
   DS010910 10 Reactions
   DS010925 25 Reactions
Contents: DuraScribe? T7 Enzyme Mix, RNase-Free DuraScribe? T7 10X Reaction Buffer, ATP, GTP, 2′-F-dCTP, 2′-F-dUTP, DNase I, DTT, Control Template DNA (linearized), Sterile Deionized Water.
DuraScribe? SP6 Transcription Kit
   DS041010 10 Reactions
Contents: DuraScribe? SP6 Enzyme Mix, DuraScribe? SP6 10X Reaction Buffer, ATP, GTP, 2′-F-dCTP, 2′-F-dUTP, DNase I, DTT, Control Template DNA (linearized), Sterile Deionized Water.

 

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