hti熒光底物簡介
haemtech基于 ANSN 的熒光底物
的一般結構圖解了基于6-氨基-1-萘磺酰胺 (ANSN) 熒光底物的一般結構。在本族化合物中,R1是COOH-末端殘基通常是精氨酸的三肽。R2和R3可以是氫、烷基、芳基或環烷基。虛線表示各種絲氨酸蛋白酶水解的位點。
含有熒光報告基團 6-amino-1-naphthalene-sulfonamide (ANSN) 的底物是監測各種絲氨酸蛋白酶的酶活性的有用化合物 (1-12)。在此類化合物中,ANSN 報告基團與短的三肽序列相連(在 R1 位置)。肽序列旨在優化酶和底物之間的相互作用。可以添加到 R2 和 R3 位置的其他成分反映了 P' 亞位點位置的變化,并且通常會影響底物的動力學參數。作為有效底物的化合物在三肽和 ANSN 基團之間水解。一旦從肽部分切下,ANSN 基團的相對熒光就會增加約 1000 倍。
下頁確定的動力學特性將有助于選擇合適的底物。已證明 ANSN 底物對因子 VIIa (1-5,7,9,10,12) 的分析特別有用。盡管單獨的因子 VIIa 的底物水解速率相對較慢,但當組織因子加入分析系統時,幾種化合物(例如化合物 SN-17a)的 kcat 會發生很大變化。
使用信息:
基于 ANSN 的底物以 DMSO 中的 10 mM 儲備溶液形式提供,通??捎糜诜治?400 nM 至低至 50pM 濃度范圍內的酶。ANSN 底物通常以 50 到 100 µM 的最終濃度使用,并且可以在大多數生理緩沖液(即 TBS、HBS、PBS 等)中稀釋到該最終濃度。反應(熒光的相對變化)可以使用標準熒光計或熒光讀板器進行監測。動力學或終點模式可與設置在以下波長(激發=352nm,發射=470nm)的儀器一起使用。通過在發射光束中使用 390 到 450 nm 長通截止濾波器,可以最大限度地減少光偽影。
下表列出了每種底物的動力學特性,表下方列出了期刊參考文獻列表以作為使用示例。
DMSO 中的儲備底物溶液應在 4°C 或更低的溫度下冷凍儲存,并應避光。在這些條件下,化合物將保持穩定超過一年。
**下表的關鍵字:K m = µM;k貓= s -1 ; k cat /K m = M -1 s -1 x 10 -5 ; ND=未確定
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結構 | D-AFK-ANSNH-iC 4 H 9 .2HBr |
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對...有用 | 對纖溶酶有用 |
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動力學特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
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?中號 | ND | ND | ND | ND | ND | ND | ND | 130 |
K貓 | ND | ND | ND | ND | ND | ND | ND | 3.7 |
K貓/K M | ND | ND | ND | ND | ND | ND | ND | 0.28 |
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結構 | Mes-D-LGR-ANSN(C 2 H 5 ) 2 |
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對...有用 | 對因子 Xa 有用 |
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動力學特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
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?中號 | 31 | 180 | 200 | 125 | 580 | 113 | ND | ND |
K貓 | 0.63 | 0.007 | 0.79 | 36 | 15 | 0.055 | ND | ND |
K貓/K M | 0.2 | ND | 0.04 | 2.9 | 0.26 | 0.005 | ND | ND |
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結構 | D-LPR-ANSNH-C 3 H 7 • 2 HCl |
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對...有用 | 對因子 XIa 有用 |
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動力學特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
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?中號 | 0.5 | 300 | 300 | 171 | 75 | 45 | 98 | ND |
K貓 | 19 | 0.07 | 4.5 | 3.3 | 53 | 52 | 0.31 | ND |
K貓/K M | 380 | 0.002 | 0.15 | 0.19 | 7.1 | 12 | 0.03 | ND |
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結構 | D-FPR-ANSNH-C 6 H 11 • 2 HCl |
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對...有用 | 對凝血酶和 VIIa 有用 |
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動力學特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
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?中號 | 0.4 | 150 | 330 | 150 | ND | 7.8 | 36 | ND |
K貓 | 17 | 0.05 | 8.4 | 0.32 | ND | 6.6 | 0.074 | ND |
K貓/K M | 430 | 0.004 | 0.25 | 0.02 | ND | 8.6 | 0.02 | ND |
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結構 | D-FPR-ANSNH-C 4 H 9 • 2 HCl |
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對...有用 | 對因子 VIIa 有用 |
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動力學特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
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?中號 | ND | 186 | 102 | ND | ND | 53 | ND | ND |
K貓 | ND | 0.11 | 2.7 | ND | ND | 21 | ND | ND |
K貓/K M | ND | 0.006 | 0.26 | ND | ND | 4 | ND | ND |
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結構 | Boc-L-(pF)FPR-ANSNH-C 2 H 5 |
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對...有用 | 對 tPA 有用 |
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動力學特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
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?中號 | 3.7 | 50 | 217 | ND | ND | ND | 71 | ND |
K貓 | 44 | 0.008 | 0.88 | ND | ND | ND | 1.03 | ND |
K貓/K M | 120 | 0.002 | 0.04 | ND | ND | ND | 0.15 | ND |
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結構 | Boc-L-FPR-ANSNH-C 2 H 5 |
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對...有用 | 對凝血酶有用 |
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動力學特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
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?中號 | 17 | ND | ND | 100 | ND | 540 | 47 | ND |
K貓 | 58 | ND | ND | 0.31 | ND | 2.2 | 0.011 | ND |
K貓/K M | 34 | ND | ND | 0.003 | ND | 0.04 | 0.002 | ND |
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結構 | L-EGR-ANSNH-C 3 H 7 • 2 HBr |
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對...有用 | 對因子 XIa 有用 |
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動力學特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
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?中號 | 100 | ND | ND | 110 | 225 | 440 | ND | ND |
K貓 | 2.5 | ND | ND | 0.2 | 82 | 17 | ND | ND |
K貓/K M | 0.25 | ND | ND | 0.02 | 3.6 | 0.39 | ND | ND |
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結構 | BOC-D-VLR-ANSNH-C 4 H 9 |
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對...有用 | 對 aPC 有用 |
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動力學特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
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?中號 | 19 | 42 | 170 | 19 | ND | 3.9 | ND | ND |
K貓 | 0.055 | 0.007 | 1.6 | 0.055 | ND | 2.1 | ND | ND |
K貓/K M | 0.03 | 0.002 | 0.09 | 0.03 | ND | 5.2 | ND | ND |
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結構 | D-VPR-ANSNH-C 4 H 9 • 2 HCl |
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對...有用 | 對凝血酶和 aPC 有用 |
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動力學特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
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?中號 | 2 | 89 | 52 | 160 | 520 | 54 | 110 | ND |
K貓 | 110 | 0.019 | 0.76 | 3.3 | 92 | 72 | 0.71 | ND |
K貓/K M | 550 | 0.002 | 0.14 | 0.21 | 1.8 | 13 | 0.065 | ND |