Transcreener CD73檢測可測量由ecto-5'-核苷酸酶(也稱為5'-核苷酸酶,NT5E,分化簇73或CD73)產生的腺苷(ADO)。通過測量ADO的產量,研究人員可以有效地確定該酶的活性。該測定法為篩選CD73調節劑的整個化合物文庫提供了強大的工具,以幫助尋找疾病的新療法,例如癌癥。
該測定法使用偶聯酶,該偶聯酶使用CD73產生的ADO產生產物AMP和ADP。然后可以使用受信任的TranscreenerADP²分析組件來測量ADP。該試劑盒配有測量活性所需的所有檢測試劑。抑制劑篩選測定試劑盒中不包括CD73酶。
外源核苷酸是與細胞膜結合的酶,具有外部定向的活性位點,可將核苷酸代謝為核苷,對于維持免疫穩態至關重要。CD39將ATP和ADP水解為AMP。CD73將AMP進一步加工成腺苷,從而對許多疾病產生重大影響。近的研究表明,腺苷在腫瘤微環境中的免疫抑制中起著關鍵作用,而外切核苷酸酶正成為有希望的免疫腫瘤學靶標。了解更多有關使用TranscreenerAMP²測定法靶向CD39的信息。
這次演講的重點 是在基礎研究和藥物發現中使用Transcreener®ADP 2分析法測量腺苷。涵蓋的主題包括:
Transcreener CD73測定法采用易于HTS使用的混合讀取格式。運行您的酶反應,添加Transcreener試劑,然后閱讀板。該測定與96、384和1536孔格式兼容。
當原始數據轉換為使用標準曲線生成的腺苷時,該測定法證明了線性。
Transcreener Assays設計用于以高通量格式篩選化合物庫。還可以使用該測定法進行隨訪SAR,從而輕松確定抑制劑的效價。
使用CD73活性測定法篩選了來自Chembridge多樣性庫的子集。該子集的ah率為0.85%,而穩健的Z'為0.81。
在存在5 pM CD73的情況下PSB 12379的劑量反應曲線。該數據說明IC 50為19 nM。
使用優化的CD73反應條件進行的Z'測量表明存在可靠的分析方法。如此強大的數據對于大尺寸的高通量篩選至關重要,由于大量樣品難以完成。
供應商 | 儀器 | ||
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TriStar²SLB 942 | |||
密特拉拉斯LB 943 | |||
Cytation™5 | |||
Cytation™3 | |||
Cytation™1 | |||
Synergy™H1 | |||
Synergy™2 / H4 / 4 | |||
Synergy™HTX | |||
Synergy™Neo 2 | |||
POLARstar ®歐米茄 | |||
FLUOSTAR ®歐米茄 | |||
PHERAstar ® FSX | |||
PHERAstar ®加/ FS | |||
CLARIOstar ® /加 | |||
分析師® GT / HT | |||
雙子座® XPS / EM | |||
的SpectraMax ® M2 / M2e的 | |||
的SpectraMax ® M5 /的M5e / FlexStation ® 3 | |||
的SpectraMax ®范式 | |||
的EnVision ® /的EnVision ® XCITE | |||
無限® M1000 / M1000Pro / Safire2™ | |||
無限® M200 | |||
無限® F500 | |||
無限® F200 /超進化 | |||
Spark™10M |
零件 | 筆記 |
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ADP²抗體 | 核苷酸ADP特異的抗體。 |
ADP追蹤器 | 替換后,可以以FP分析格式讀取熒光的變化。 |
腺苷 | 用于啟動CD73酶促反應并生成AMP / ADO標準曲線。 |
安培 | AMP用于創建ADO / AMP標準曲線,并用作CD73的底物。 |
三磷酸腺苷 | 用作偶聯酶的底物。 |
耦合酶 | 將ADO傳輸到ADP和AMP,從而允許通過TranscreenerADP²分析組件測量ADP。 |
零件 | 筆記 |
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CD73酶 | 我們已經成功使用了R&D Systems Cat。公司的純化重組CD73酶。#5795-EN。 |
酶緩沖液 | 我們已經成功使用了pH 7.5的50 mM Tris,5 mM MgCl 2,1%DMSO和0.01%Brij-35緩沖液。 |
停止解決方案 | 該測定設計為以動力學模式運行。該套件沒有停止解決方案。 |
檢測板 | 可以直接通過BellBrook實驗室購買測定板。
FP-需要一個具有非粘合表面的全黑色印版。我們建議使用康寧384孔板Cat。#4514 |
*對于定制或批量訂單(超過10,000口井),
貨號。 | 產品描述 | 價錢 |
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3026-1 K | Transcreener CD73 FP測定法(1,000測定法,384孔) | $ 995 |
3026-10K | Transcreener CD73 FP測定法(10,000測定法,384孔) | $ 5,699 |
貨號。 | 產品描述 | 價錢 |
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2229 | 康寧384孔黑色檢測板(#4514),3包(1,000多種檢測) | $ 45 |
2230 | 康寧384孔黑色檢測板(#4514),30包(10,000+檢測) | $ 400 |
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