ALSTEM是一家位于灣區的早期生物技術公司，擁有快速擴展的產品和服務組合，為生物制藥和學術機構提供服務。受到加利福尼亞干細胞研究承諾的啟發，ALSTEM于2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術專業知識的科學家創立。
描述
ViralBoost Reagent（500X）是一種新型的小分子混合物，可以增強病毒的產生，是一種功能強大，廣泛適用于有效病毒包裝的試劑。ViralBoost試劑在轉錄水平上穩定地調節病毒RNA包裝，這可以增加逆轉錄病毒顆?；蚵《绢w粒的產量高達10倍。易于使用的協議使ViralBoost Reagent非常適合各種規模的病毒包裝。
圖1.來自GFP逆轉錄病毒轉導的HEK 293T細胞的流式細胞術數據，其在不存在和存在ViralBoost試劑的情況下包裝。
圖2.用GFP慢病毒轉導的HEK 293T細胞，其與ViralBoost一起包裝和不包裝
產品名稱 | ViralBoost |
目錄 ＃ | VB100 |
尺寸 | 1毫升 |
運輸 | 環境溫度 |
儲存和穩定性 | 儲存在4°C。根據指示儲存，本產品可穩定保存12個月。 |
質量控制 | 每批ViralBoost試劑在使用人胚胎腎293T細胞的轉染試驗中進行功能測試。 |
用法 | 用逆轉錄病毒或慢病毒包裝質?；旌衔镛D染人胚腎（HEK）293T細胞后6-14小時，用補充有10％熱滅活的胎牛血清和0.5％青霉素 - 鏈霉素的新鮮DMEM培養基替換培養基，并添加將1/500體積的ViralBoost試劑加入一體積的新鮮培養基中，并在37℃下在CO2培養箱中繼續培養。 |
限制使用 | 僅供研究使用。不得用于診斷或治療程序。 |
ViralBoost Reagent是一種新型的小分子混合物，用于高滴度病毒的生產，是一種功能強大，廣泛適用于有效病毒包裝的試劑。它穩定地調節轉錄水平上的病毒RNA包裝，這可以大大增加逆轉錄病毒顆?；蚵《绢w粒的產量，多可達10倍。易于使用的協議使ViralBoost Reagent非常適合各種規模的病毒包裝。
第1天：轉染前一天，
1.用1x明膠涂布板/盤30分鐘。吸出明膠，每100mm平板涂3-4~10×10 6 HEK 293T細胞。每塊板使用10毫升培養基。
注意：良好的單細胞懸浮液（胰蛋白酶消化良好）和均勻分布細胞非常重要。
第2天：轉染
注意：按照制造商的協議準備轉染。
2.準備兩個試管，并在每個試管中加入0.5 ml DMEM。在一個試管中，加入DNA混合物（含有病毒載體和包裝混合物）并通過標記管充分混合。在另一個試管中，添加NanoFect（目錄號NF100）。通過標記管混合。
注意：在室溫（20-25°C）下孵育不超過5分鐘。
3.將NanoFect-DMEM混合物轉移到DNA管中，上下移液2-3次。通過渦旋混合5-10秒充分混合。
4.在室溫下孵育約15分鐘，以允許NanoFect / DNA復合物自組裝。
5.將NanoFect / DNA混合物逐滴添加到板上，輕輕搖動板并將板放回培養箱中
第3天：更改培養基并添加ViralBoost
6.用10ml新鮮培養基替換上清液，并補充20μlViralBoost（500X）。將平板放回細胞培養箱中。
第4天：收集病毒
！小心小心處理病毒材料并避免溢出。使用漂白劑凈化有害液體（10％終濃度30分鐘）。
7.將上清液收集在50ml錐形管中并置于冰上。將上清液以1,000g離心10分鐘以除去細胞碎片。（將離心機預設為4°C）
8.通過0.45μm過濾器過濾上清液。將過濾的上清液轉移至無菌容器中，并向每4體積含病毒的上清液中加入1體積的冷逆轉錄病毒/慢病毒沉淀溶液（4℃，目錄號VC100和VC200）。（例如：5ml逆轉錄病毒/慢病毒沉淀溶液，含20ml病毒上清液）。
9.充分混合并冷藏過夜。
第5天：濃縮病毒
10.在4℃下以1500g離心混合物30分鐘。離心后，病毒顆?？赡茉谌萜鞯撞匡@示為米色或白色顆粒。
11.丟棄上清液。通過以1500g離心5分鐘來旋轉殘留溶液。通過抽吸去除所有的液體痕跡，小心不要打擾顆粒中沉淀的病毒顆粒。
12.使用冷的無菌PBS或DMEM在4℃下以1/10至1/100的原始體積重懸病毒顆粒。在低溫小瓶中等分并儲存在-80°C直至準備使用。
注意：可以使用病毒濃縮/純化程序去除ViralBoost Reagent。當直接用于轉導HEK 293T細胞時，尚未檢測到具有ViralBoost試劑的粗病毒顆粒對目的基因表達的副作用，但是從細胞系到細胞系可能是不同的。建議事先測試ViralBoost對靶細胞的影響。
貨號 | 品名 | 規格 | 品牌 |
VB100 | ViralBoost | 1毫升 | alstembio |
VC100 | 慢病毒沉淀解決方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
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