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mypols 6201S說明書

 更新時間:2018-08-16 點擊量:995

myPOLS Biotec正在開發新一代的DNA聚合酶

用于和可靠的應用,例如個性化醫療,病原體檢測,DNA和RNA診斷,法醫學等等。

 

我們的研發活動包括:

  • 改進的DNA聚合酶用于SNP檢測和甲基化特異性PCR。
  • 病原體檢測分析,例如用于流感和諾如病毒診斷。
  • 具有逆轉錄酶活性的熱穩定DNA聚合酶。
  • 抑制劑抗性聚合酶,用于從樣品中直接PCR,如全血,唾液,細菌,細胞 - 顆粒,植物等。 

 

 

后但并非不重要:我們所有的酶和混合物都是在康斯坦茨內部生產的,并經過常規測試,符合高質量標準。

 

myPOLS Biotec是一家來自康斯坦茨大學的生物技術公司,來自Andreas Marx教授的研究小組。憑借我們在高通量DNA聚合酶設計方面的專業知識,我們為您的應用定制酶。

 

Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix

6101S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix

100次反應á25μl

1 x 1.25毫升

#6101M

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix

500次反應á25μl

5 x 1.25毫升

#6201S

Volcano3G RT-PCR探針2x Master Mix(+ ROX)

100次反應á25μl

1 x 1.25毫升

#6301S

Volcano3G RT-PCR探針2x Master Mix(+ GreenDye)

100次反應á25μl

1 x 1.25毫升

 #6401S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix(+ GreenDye,+ ROX)

100次反應á25μl

1 x 1.25毫升

包含所有必需的組分,包括dNTP和優化的反應緩沖液,可在所有標準PCR循環儀中實現成功可靠的實時qPCR和RT-qPCR。包含的酶由我們的*表現,熱啟動配方,工程Taq DNA聚合酶和Volcano3G DNA聚合酶的混合物組成。該混合物被設計成適合多重PCR,病原體檢測qPCR和各種基于探針的DNA和RNA靶標的qPCR。 

包含的Volcano3G DNA聚合酶是一種工程化的,極其熱穩定的逆轉錄酶和組合的DNA聚合酶,通過定向的人工進化獲得。基于適體的DNA聚合酶的熱啟動制劑防止錯誤擴增。高于50°-55°C的溫度會使適體的二級結構熔化并使聚合酶釋放。 

 

 應用

  • 快速檢測和鑒定RNA和DNA靶標
  • 逆轉錄qPCRs(RT-qPCRs)
  • qPCRs(DNA或RNA目標)
  • 多重PCR
  • 實時PCR
  • 基于探針的PCR
  • 病原體檢測
  • 入門擴展 
  • 終點PCR
  • 篩選/高通量PCR
  • SELEX

典型的RT-PCR方案

溫度

時間

初始變性步驟

80℃下

60秒

逆轉錄步驟*

50℃下

600秒

PCR循環:

 

 

變性

95℃

10秒

退火/延伸**

各種*

50秒(35-50周期)

可以使用兩步法和三步法PCR方案。

* = Volcano3G DNA聚合酶允許直接來自RNA模板的“零步”RT-PCR(沒有等溫逆轉錄步驟),因為逆轉錄也在循環PCR延伸步驟期間與DNA擴增同時發生。因此,逆轉錄步驟是任選的,并且在某些情況下可以省略。

** =通過運行溫度梯度理想地建立新的RT-PCR,以便找到每個引物對的*逆轉錄/退火/延伸溫度。引物的退火溫度受其核酸序列和反應緩沖液組成(鹽和pH)的強烈影響。

通常,Volcano3G DNA聚合酶是*熱穩定的,并且在55-95°C之間活躍。

反應設置

使用的實驗建議:

在退火/延伸步驟中使用溫度梯度進行PCR,以找到測定的宜溫度。

大多數RT-PCR分析在短時間80℃(1分鐘)變性步驟和50-55℃(10分鐘)的逆轉錄步驟以及標準PCR循環條件下都能很好地起作用。

 

建議的反應設置 

零件

終濃度

引物前移(10μM)

1.0μl

500 nM(50-1000 nM)

引物反向(10μM)

1.0μl

500 nM(50-1000 nM)

探針(10μM)

 xμl

50 - 1000 nM

Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix

10μl

1X

模板/樣品提取物*

 yμl

 

 不含核酸酶的水

 總反應體積高達20μl

 

* =推薦的模板濃度在0.004ng /μl-0.1μg/μl(總RNA或基因組DNA)之間。

 

在使用前仔細旋轉并混合所有溶液。

質量控制

RT-PCR活性:測試Volcano3G RT-PCR Mix的成功RT-PCR性能。在實時PCR循環儀中從人總RNA提取物擴增151bp片段(HPRT1 mRNA),并將其顯示為單個擴增產物。
DNA聚合酶活性:使用人工DNA模板和DNA引物監測Volcano3G DNA聚合酶活性并將其調整為特定的DNA聚合酶活性。
酶濃度通過蛋白質特異性染色確定。有關批次特定濃度,請通過info@mypols.de查詢更多信息。

 

存儲

本產品采用冷藏包裝。請在抵達-20°C時存放產品。
通過以等分試樣存儲來小化凍融循環的次數。對于日常使用,我們建議將等分試樣保持在4°C。

 

 

Volcano3G是否具有RNAse-H樣活性?

Volcano3G來自Taq DNA聚合酶,因此它沒有任何RNase-H活性。在循環PCR延伸步驟期間,逆轉錄與DNA擴增同時發生。

然而,Volcano3G具有核酸酶結構域作為Taq野生型酶,可用于基于水解的實時PCR。 

 

我怎樣才能將擴增限制在mRNA靶標上?

我只獲得引物二聚體。如何建立我的RT-PCR?

我可以用Volcano逆轉錄長RNA鏈(> 500 bp)嗎?

我在瓊脂糖凝膠上看到一個低分子帶 - 這是Volcano3G RT PCR Mix的污染嗎?

 

 

貨號

品名

規格

品牌

8100S

Volcano2G DNA聚合酶

 250 U,5U /μl,50μl

mypols

8100M

Volcano2G DNA聚合酶

1000U,5U /μl,200μl

mypols

6101S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix

100 reactions á 25 µl

mypols

1 x 1.25 ml

mypols

6101M

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix

500 reactions á 25 µl

mypols

5 x 1.25 ml

mypols

6201S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+ROX)

100 reactions á 25 µl

mypols

1 x 1.25 ml

mypols

6301S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye)

100 reactions á 25 µl

mypols

1 x 1.25 ml

mypols

6401S

Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye, +ROX)

100 reactions á 25 µl

mypols

1 x 1.25 ml

mypols

 

上海起發實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務商

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