美國GRC公司：Glen Research Corp 創建于1987年，專注于為DNA和RNA寡核苷酸的化學合成，修飾，標記和純化提供zui廣泛的亞磷酰胺和固體支持物，現已有近三十年的歷史，在低聚核苷酸及修飾、改性領域一直處于地位。

Glenresearch BACKBONE MODIFICATION

骨干修改 

甲基膦酰胺

甲基膦酰胺可以按照常規的CE亞磷酰胺方案用于DNA合成儀中，以產生含有一個或多個甲基膦酸酯鍵的寡核苷酸。但是，脫保護和純化技術不同，程序說明包含在技術公告中。我們還提供具有乙?；Ｗo的dC單體。¹ 在裂解步驟中用氫氧化銨除去該保護基團，在脫保護步驟中使用乙二胺中的乙二胺消除dC位點的修飾。

參考

1. MP Reddy，F。Farooqui和NB Hanna，Tetrahedron Lett。，1996,37,8691-8694。

其他儀器類型

所有次要堿基，RNA產物和改性劑都包裝在適用于ABI和其他儀器的隔膜小瓶中。如果您想要其他類型的樣品瓶/色譜柱，請將以下內容添加到目錄號的末尾。

PACE亞磷酰胺

膦?；宜狨ィ≒ACE）修飾的寡核苷酸作為生物修飾劑在各種研究應用中顯示出巨大的潛力。PACE單體是膦?；人狨误w家族的一部分。單體可以容易地摻入復雜的寡核苷酸中，并且與多種其他糖或異堿基修飾相容。PACE DNA可以通過羧酸官能團綴合。已顯示它們在siRNA雙鏈體中具有活性，并且當與硫代磷酸酯結合時加速RNase H-1的初始切割速率。然而，迄今為止有趣的觀察結果是它們在培養細胞的滲透方面表現出的增強。

膦酰基乙酸鹽*溶于乙腈，推薦濃度為0.1M，與標準DNA合成儀兼容。使用標準方案時，建議使用1H-四唑的33.3分鐘偶聯時間。我們上提供了一種改進的用于AB儀器的LV循環，可將1H-Tetrazole的偶聯時間縮短至15分鐘。氧化必須先于合成循環中的封端。氧化試劑取決于合成的類型。對于*修飾的寡核苷酸，我們推薦使用非水氧化劑樟腦磺酰氯氮雜環丙烷（CSO）作為0.1M溶液。對于混合磷酸二酯和膦酰基乙酸酯修飾的寡核苷酸，推薦使用0.5M CSO溶液。低水氧化劑，40-4032，雖然據報道這可以導致少量膦酰基乙酸酯轉化為磷酸二酯，但它是另一種氧化劑。我們還建議使用Cap Mix B和DMAP（40-4020）代替含有1-甲基咪唑的標準Cap Mix B.

用于切割和去保護的標準方案需要兩步法，使用1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯（DBU）進行預處理，隨后使用甲胺進行切割。DBU用于使二甲基氰基乙基（DMCE）保護基脫保護并在脫保護過程中防止堿的烷基化。建議在水中用40％甲胺裂解，并且當使用AMA脫保護時我們也有良好的結果。

知識產權

這些產品受美國6,693,187和7,067,641，正在申請和Lievre Cornu擁有的外國同行的保護。購買所有或任何這些產品包括僅在僅用于研究的寡核苷酸的制造中使用該產品的有限許可，并且其使用未被授權也不用于診斷或治療用途。

其他儀器類型

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窗體頂端

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甲基亞磷酰胺

多年來，Glen Research除了β-氰乙基（CE）亞磷酰胺之外還提供了甲基亞磷酰胺，因為在這種情況下，不太活潑的氰乙基不是優勢。我們的一些客戶，可能記得用甲苯酚專門去除甲基，試圖使用這些單體來制備有趣的，不帶電的和核酸酶抗性的甲基磷酸三酯鍵。不幸的是，這種連接對氫氧化銨是不穩定的，并且形成了規則的磷酸二酯鍵（以及少量的斷鏈）。我們為此應用提供UltraMild甲基亞磷酰胺。由這些單體制備的寡聚物可以用碳酸鉀在甲醇中脫保護，以產生甲基磷酸三酯鍵。由于這些聯系是非對映的和不帶電荷的，寡頭可能很難處理。因此，使用這些單體以及常規的UltraMild CE亞磷酰胺可能會產生嵌合體。如果寡核苷酸中包含許多dG殘基，我們建議使用苯氧乙酸酐（Pac₂ O）在Cap A.此修改消除了異丙基苯氧基（IPR-PAC）保護基的dG的用乙酸從乙酸酐封端混合物的交換的可能性。

其他儀器類型

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ULTRAMILD SOLVENTS / REAGENTS

H-膦酸酯單體

通過HPLC分析Glen Research H-膦酸酯并進行合成測試。H-膦酸鹽尤其可用于制備通過亞磷酰胺化學無法獲得的修飾的核苷酸間鍵。常用的應用是放射性標記的硫代磷酸酯的制備，因為硫化反應在合成器外進行。這些單體包裝在ABI型小瓶中（見注釋框）。

其他儀器類型

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H-膦酸鹽試劑

我們的H-膦酸鹽溶劑和試劑已經停產。使用高純度產品和下面所示的配方可以容易地制備H-膦酸鹽試劑。

1-金剛烷碳酰lu可購自Aldrich，目錄號117722.稀釋至0.1M。
?（單體和封端劑的活化劑）

乙腈/吡啶（50:50），無水
（單體稀釋劑）

乙腈/吡啶（95：5），無水
（活化劑稀釋劑）

1％乙腈/吡啶中的異丙基亞磷酸酯（50:50）
（封端試劑）

乙腈/吡啶（50:50）
（中和劑和洗滌溶劑）

4％I ₂的吡啶/ H 2 O / THF（10:10:80）THF / H 2 O / TEA（80:10:10）
（兩種試劑都是H-膦酸酯鍵氧化所必需的）

縮寫

Ac ₂ O =乙酸酐
CE =氰乙基
CPG =受控孔徑玻璃
DCA =二氯yi酸
DCM =二氯甲烷
DMAP =二甲基氨基吡啶
dmf =二甲基甲脒
DMT = 4,4'-二甲氧基三苯甲基
I ₂ =碘
iPr =異丙基
MeIm = 1-甲基咪唑
μm=微摩爾（s）
nm =納摩爾（s）
Pac =苯氧基
乙?；鵓hOAc =苯氧基乙酰基
TCA =三氯yi酸
THF =四氫呋喃

THIOPHOSPHORAMIDITES

在DNA磷酸二酯鍵中用硫原子取代兩個非橋接氧原子產生二硫代磷酸酯（PS2）鍵。¹與天然DNA一樣，二硫代磷酸酯鍵在磷上是非手性的。該類似物*抵抗核酸酶降解，并與DNA和RNA形成復合物，穩定性稍差。²此外，已發現PS2-ODNs與其磷酸二酯類似物^2-6結合的蛋白質具有更高的親和力，這表明PS2-ODNs可能具有硫修飾的磷酸酯適體（硫代適體）^3,6-形式的額外效用。⁸用于治療和診斷應用。

1. 硫代亞磷酰胺（ThioPAs）不溶于無水乙腈稀釋劑。相反，乙腈中的10％DCM（v / v）是所有四種硫代PA的理想稀釋劑，終的亞胺濃度為0.15M。
2. 在含有10％DCM的無水乙腈中，ThioPPA比正常DNA亞磷酰胺的穩定性稍差; 然而，在室溫下溶解兩天后，所有四種硫代PA的偶聯效率都沒有降低。
3. 合成后，合成器上的thioPA瓶應更換為含有乙腈稀釋劑的瓶子，合成器管線用乙腈沖洗。

固相合成PS2鍵的典型循環不同于合成正常磷酸鍵的標準循環。偶合后，然后用DDTT硫化所得的硫代亞磷酸三酯。硫化后進行封端。

完成自動合成后，使用含有20mM DTT的濃氨：乙醇（3：1，v：v）混合物在55℃下進行脫保護15-16小時。

參考

1. J. Nielsen，WKD Brill和MH Caruthers，Tetrahedron Letters，1988,29,2911-2914。
2. L.Cummins，D.Graff，G.Beaton，WSMarshall，和MH Caruthers，Biochemistry，1996,35,8734-41。
3. X.Yang和DG Gorenstein，Curr Drug Targets，2004,5,705-15。
4. W .S。Marshall，和MH Caruthers，Science，1993,259,1564-70。
5. JL Tonkinson等，Antisense Research and Development，1994,4,269-278。
6. X.Yang等，Bioorg Med Chem Lett，1999,9,3357-62。
7. X.Yang等人，Ann NY Acad Sci，2006,1082,116-9。
8. X.Yang等，Nucleic Acids Res，2002,30，e132。

其他儀器類型

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硫化試劑

Glen Research的硫化試劑用于使用CE亞磷酰胺化學制備硫代磷酸酯鍵。每種試劑都具有以下屬性：

1. 可靠地溶解，使其可以安全地用于自動合成器。
2. 反應快速（30秒），使得該過程在小規模上方便，并且易于擴大規模。
3. 過程是有效的，優于96％的連接是硫代磷酸酯，其余是磷酸二酯。

訂購硫化劑（Beaucage Reagent）時，請同時訂購適合您儀器的硅烷化瓶。提供試劑訂單時，一瓶不收費。

在用乙腈沖洗并干燥后，可以重復使用硅烷化瓶。額外的硅烷化瓶的價格如下所示。將試劑溶解在乙腈中，濃度為1g / 100mL。硫化試劑II（3 - （（二甲氨基亞甲基）氨基）-3H-1,2,4-二噻唑-3-硫酮，DDTT）具有Beaucage的所有性質試劑在合成器中增加溶液穩定性并提供強硫酸化RNA連接能力。硫化試劑II有粉末形式和穩定的溶液。